Pufferoldatok vízbázisú folyadékok, amelyek tartalmaznak mind gyenge savat, mind annak konjugált bázisát. Kémia miatt a pufferoldatok pH-értékét (savasságát) szinte állandó szinten tarthatják, még akkor is, ha kémiai változások zajlanak. A pufferrendszerek a természetben előfordulnak, de rendkívül hasznosak a kémiában is.
Puffermegoldások felhasználása
A szerves rendszerekben a természetes pufferoldatok állandó pH-értéket tartanak fenn, lehetővé téve a biokémiai reakciók bekövetkezését a szervezet károsítása nélkül. Amikor a biológusok a biológiai folyamatokat tanulmányozzák, ugyanazon állandó pH-értéket kell tartaniuk; ehhez készített pufferoldatokat használtak. A pufferoldatokat először 1966-ban írták le; sok azonos puffert használnak ma.
A biológiai puffereknek hasznosnak kell lenniük számos kritériumnak. Pontosabban vízoldhatónak, de szerves oldószerekben nem oldódnak. Nem szabad átjutniuk a sejtmembránon. Ezen túlmenően nem szabad mérgezőnek, semlegesnek és stabilnak lennie minden olyan kísérlet során, amelyre felhasználták.
A pufferoldatok természetesen előfordulnak a vérplazmában, ezért a vér pH-ját állandóan 7,35 és 7,45 között tartja fenn. A pufferoldatokat a következőkben is használják:
- erjedési folyamatok
- haldokló szövetek
- kémiai elemzés
- a pH-mérők kalibrálása
- DNS extrakció
Mi a Tris puffer megoldás?
A Trisz rövid jelentése a trisz (hidroxi-metil) -aminometánról, amely egy kémiai vegyület, amelyet gyakran használnak sóoldatban, mert izotóniás és nem mérgező. Mivel a Tris pKa értéke 8,1, és a pH szintje 7 és 9 között van, a Tris pufferoldatokat gyakran használják számos kémiai elemzésben és eljárásban, beleértve a DNS extrakciót. Fontos tudni, hogy a trisz pufferoldat pH-ja változik az oldat hőmérsékletével.
Hogyan lehet elkészíteni a Tris puffert?
Könnyen megtalálható a kereskedelemben beszerezhető tris pufferoldat, de a megfelelő felszereléssel is elkészítheti.
anyagok:
Számítsa ki az egyes elemek mennyiségét a kívánt oldat moláris koncentrációja és a puffermennyiség alapján.
- trisz (hidroxi-metil) -amino-metán
- desztillált ionmentesített víz
- HCl
eljárás:
- Kezdje annak meghatározásával, hogy melyik koncentráció (molaritással) és a készíteni kívánt Tris puffer mennyisége. Például a sóoldathoz használt Tris pufferoldat 10 és 100 mM közötti. Miután eldöntötte, hogy mit készít, számolja ki a szükséges Trisz-molok számát oly módon, hogy a puffer moláris koncentrációját megszorozzuk az előállított puffer térfogatával. (Trisz móljai = mol / L x L)
- Ezután határozza meg, hogy hány gramm Trisz ez az, ha megszorozzuk a molok számát a Tris molekulatömegével (121,14 g / mol). gramm Tris = (mol) x (121,14 g / mol)
- Oldja fel a Tris-t a desztillált ioncserélt vízbe, a kívánt végtérfogat 1 / 3-1 / 2-ig.
- Keverjük össze sósavval (például 1 M sósavval), amíg a sósav fel nem válik pH mérő megadja a kívánt pH-t a Tris pufferoldathoz.
- A puffert vízzel hígítjuk, hogy elérjük a kívánt végső oldatmennyiséget.
Az oldat elkészítése után hónapokig szobahőmérsékleten, steril helyen tárolható. A trisz puffer oldat hosszú eltarthatósága lehetséges, mivel az oldat nem tartalmaz fehérjét.