Foszfátpufferolt sóoldat (PBS) egy pufferelési megoldás ezt általában immunhisztokémiai (IHC) festéshez használják, és gyakran használják a biológiai kutatásokban is. A PBS vízbázisú sóoldat, amely nátrium-hidrogén-foszfátot, nátrium-kloridot és bizonyos esetekben kálium-kloridot és kálium-dihidrogén-foszfátot tartalmaz.
Immunhisztokémiai festés
Az immunhisztokémia az antigének, például fehérjék kimutatásának folyamatát jelenti a a szöveti szekciót az antitestek elvének alkalmazásával, biológiailag az antigénekhez kötődve szövetekben. Az immunfluoreszcens festés volt az első immunhisztokémiai festési módszer.
Az antigének láthatóvá válnak, ha antitestekkel konjugálnak fluoreszcens festékek felhasználásával antigén-antitest kötő reakció. Ez a folyamat akkor fordul elő, amikor azt egy meghatározott hullámhosszú izgalmas fény aktiválja, fluoreszcens mikroszkóp alatt.
Az oldatok ozmolaritása és ionkoncentrációi megegyeznek az emberi testénél - izotóniák.
A recept a PBS pufferhez
A PBS-t többféle módon is elkészítheti. Több képlet létezik. Néhányuk nem tartalmaz káliumot, mások kalciumot vagy
magnézium.Ez a recept viszonylag egyszerű. 10x PBS törzsoldathoz (0,1 M) készült. Készíthet azonban egy 1X törzsoldatot is, vagy ezzel a 10X recepttel kezdheti meg, és 1X-re hígíthatja. Az egész folyamat körülbelül 10 percig tart, és lehetőség van a Tween hozzáadására is.
Mire lesz szüksége a PBS puffer készítéséhez
- Egybázisú nátrium-foszfát (vízmentes)
- Kétbázisú nátrium-foszfát (vízmentes)
- Nátrium-klorid
- Méretezze és mérje meg a hajókat
- Mágneses keverő és keverőrudak
- Kalibrált pH-szonda és megfelelő oldatok a pH beállításához
- 1L-es mérőlombik
- Tween 20 (opcionális)
Hogyan készítsünk PBS puffert
- Mérjünk be 10,9 g vízmentes nátrium-foszfátot (Na2HPO4), 3,2 g vízmentes nátrium-foszfátot (NaH2PO4) és 90 g nátrium-kloridot (NaCl). Oldjunk fel 1 liter desztillált víz alatt.
- Állítsa a pH-t 7,4-re, és töltse fel az oldatot 1 liter végtérfogatra.
- Használat előtt hígítsa fel 10-szer, és szükség esetén állítsa be a pH-t.
- Készíthet PBS-oldatot, amely 0,5% Tween 20-t tartalmaz, ha 5 ml Tween 20-t ad hozzá az 1 liter oldathoz.
Tippek a PBS puffer készítéséhez
A PBS-oldat elkészítése után tároljuk a puffert szobahőmérsékleten.
A nem vízmentes reagensek helyettesíthetők, de újra kell számolnia az egyes anyagok tömegét a hozzáadott vízmolekulák befogadására.
A PBS puffer felhasználásai
A foszfátpufferolt sóoldatnak sok felhasználása van, mivel izotóniás és nem toxikus a legtöbb sejtre. Használható anyagok hígításához és gyakran a sejtek tartályainak öblítéséhez. A PBS felhasználható hígítószerként a biomolekulák szárítására különféle módszerekben, mivel a benne levő vízmolekulák az anyag - például a fehérje - körül vannak felépítve. "Szárítják" és szilárd felületre rögzítik.
A pH állandó és állandó marad, hogy megakadályozzuk a sejtek pusztulását.
Az anyaghoz kötő vékony vízréteg megakadályozza a denaturációt vagy más konformációs változásokat. A karbonát pufferek ugyanarra a célra használhatók, de kevésbé hatékonysággal.
A PBS felhasználható referencia-spektrum meghatározására a fehérje adszorpció ellipszometriában.