Restrikciós fragmentumhosszú polimorfizmus (RFLP) egy genetikai elemzés molekuláris módszere, amely lehetővé teszi az egyének azonosítását a restrikciós enzim kivágás a DNS meghatározott régióiban.
RFLP analízisnek is nevezik, a technika kihasználja a polimorfizmusok az egyes emberek genetikai kódjaiban. Annak ellenére, hogy a fajok minden tagja lényegében azonos genetikai felépítéssel rendelkezik, ezek az apró különbségek a fenotípus eltéréseit, például megjelenését vagy anyagcseréjét okozzák az egyének között.
RFLP elemzési technika
Az RFLP elemzési módszer magában foglalja egy adott régió metszését DNS ismert variabilitással, restrikciós enzimekkel, majd a DNS-fragmenseket agaróz-gélelektroforézissel elválasztjuk, és meghatározzuk a fragmensek számát és a relatív méretet.
A restrikciós enzim egy enzim, egy fehérje molekula, amely a restrikciós helyeken vágja a DNS-t. Lényegében a DNS mintát felbontják és emésztik a restrikciós enzimek. A kapott fragmenseket hosszuk szerint választják el egymástól, és a fragmensek méretének mintázata minden egyes vizsgált egyénnél különbözik.
A teljes RFLP folyamat megköveteli a próba jelölését, a DNS fragmentálását, elektroforézist, blotot, hibridizációt, mosást és autoradiográfiát. A detektált RFLP-t röntgenfilmekkel autoradiográfiásan vizualizálják, ahol a DNS-fragmensek megnézhetők és elemezhetők, miután elválasztották őket egymástól elektroforézissel.
Alkalmazás az RFLP használatához
Az RFLP elemzés néhány alkalmazásához tartozik:
- DNS ujjlenyomat: A kriminalisztika RFLP elemzést használhat a gyanúsítottak azonosítására a bűncselekmények helyszínén gyűjtött bizonyítékminták alapján.
- Apaság: Az RFLP-t az apaság meghatározására vagy az ősök nyomon követésére is használják.
- Genetikai változatosság: Ez a módszer felhasználható a vadon élő állatok evolúciójának és vándorlásának, az állatpopulációk tenyésztési mintáinak, valamint egyes betegségek kimutatásának és diagnosztizálásának tanulmányozására.
A genomok variációjának RFLP detektálásának felhasználásának technikája alapvető eszköz a genom térképezésében és a genetikai betegségek elemzésében. Ha egy adott betegséggén helyét keresik egy bizonyos kromoszómában, akkor a kutatók ezt tennék elemezze a betegséggel rendelkező családtagok DNS-ét, majd keressen hasonló öröklési mintákat az RFLP-ben allél.
Miután a betegség génét lokalizálták, az RFLP elemzés más családtagokon történő elvégzése felfedheti a mutáns gének hordozót vagy jelzi a betegség általános kockázatát. Fontos megjegyezni, hogy az RFLP technikát nem használják széles körben, mivel újabb, robusztusabb technikákat alkalmaznak a DNS elemzéshez a kriminalisztika és számos más terület területén.
Negatív szempontok pf RFLP
Sajnos az RFLP elemzési technika unalmas és lassú. Eltekintve attól, hogy nagy mennyiségű DNS-t igényel, a mintának általában körülbelül egynegyedének kell lennie, azaz a DNS minták esetében viszonylag nagy - a folyamat a szonda címkézésétől a mosásig és az autoradiográfiáig egy teljes hónapot igénybe vehet, teljes.
A Human Genome Project eredményei nagyjából felváltották az RFLP szükségességét. A projekt lehetővé tette az emberi sejtekben található DNS teljes szekvenciájának, az emberi genomnak a meghatározását és az emberi genom összes génjének azonosítását.