A TAE puffer olyan oldat, amely Tris-bázist, ecetsavat és EDTA-t (Tris-acetát-EDTA) alkot. Ez történelmileg a leggyakoribb puffer az agarózgélhez elektroforézis a következő eredményekből származó DNS - termékek elemzésében: PCR erősítés, DNS tisztítási protokollok vagy DNS-klónozás kísérletek.
Ennek a puffernek alacsony ionerőssége és alacsony pufferkapacitása van. Ez a módszer a legjobban nagy (> 20 kilobázisos) DNS darabok elektroforéziséhez, és gyakran cserélni vagy hosszabb (> 4 óra) gél futási idők során újrakeringtetni kell. Ezt szem előtt tartva érdemes megfontolni a puffer több tételének elkészítését.
Tekintettel arra, hogy a puffert könnyű elkészíteni és a lépések gyorsan elvégezhetők, egynél több tétel készítése nem lehet különösen időigényes vagy nehéz. Az alábbi utasítások alkalmazásával mindössze 30 percbe telik a TAE puffer készítése.
Amire szüksége van a TAE pufferhez
Mivel a TAE puffer készítéséhez csak gyors és egyszerű utasításkészlet szükséges, az ehhez szükséges anyagszám nem túl nagy. Szüksége lesz csak EDTA (etilén-diamin-tetraecetsav) dinátrium-sóra, Trisz-bázisra és jégecetre.
A puffer készítéséhez szükség van egy pH-mérőre és a kalibrációs szabványokra is. Szüksége lesz továbbá 600 ml és 1500 ml főzőpohárra vagy lombikra, valamint mérőhengerekre. Végül ionmentesített vízre, keverőrudakra és keverőlemezekre lesz szüksége.
A következő utasításokban a képlet tömegét (az egyes elemek atomtömegét megszorozzuk az atomszámmal, majd az egyes anyagok tömegét össze kell adni) rövidítjük FW-ként.
Készítsen EDTA törzsoldatot
Az EDTA megoldást idő előtt elkészítik. Az EDTA nem megy teljesen oldatba, amíg a pH-t körülbelül 8,0-ra állítják be. 500 milliliter készletekért 0,5 M (molaritás vagy koncentráció) EDTA oldatával 93,05 g EDTA dinátrium-sót (FW = 372,2) mérünk. Oldjuk fel 400 ml ionmentesített vízben, és a pH-t nátrium-hidroxiddal (NaOH) állítsuk be. Töltsük fel az oldatot 500 ml végtérfogatra.
Készítse el részvénymegoldását
Készítsen tömény (50x) TAE törzsoldatot úgy, hogy lemérje a 242 gramm Trisz-bázist (FW = 121,14), és feloldja azt körülbelül 750 ml ionmentesített vízben. Óvatosan adjunk hozzá 57,1 ml jégsavat és 100 ml 0,5 M EDTA-t (pH 8,0).
Ezután állítsa be az oldatot 1 liter végtérfogatra. Ez a törzsoldat szobahőmérsékleten tárolható. Ennek a puffernek a pH-ját nem állítjuk be, és körülbelül 8,5-nek kell lennie.
Készítsen elő TAE puffer működési megoldását
Az 1x TAE puffer munkaoldatát úgy készítjük el, hogy a törzsoldatot egyszerűen 50-szer hígítjuk ionmentes vízben. A végső oldott koncentráció 40 mM (millimoláris) trisz-acetát és 1 mM EDTA. A puffer készen áll az agarózgél futtatásához.
Csomagolás fel
Mielőtt elkezdené, ellenőrizze a leltárt, hogy megbizonyosodjon arról, hogy rendelkezik-e a fenti anyagokkal a TAE pufferhez. Az ellátó személyzetnek képesnek kell lennie arra, hogy megmondja, van-e raktáron minden szükséges elem. Nem akarja, hogy valami hiányzik az eljárás közepén.